Kit de detecção de anticorpos contra influenza aviária altamente patogênica H5

Kit de detecção de anticorpos contra o vírus da influenza aviária H5 altamente patogênica (ensaio imunoenzimático)

Nome do produto

Nome genérico: Kit universal para teste de anticorpos contra o vírus da gripe aviária (ensaio imunoenzimático)

Especificações de embalagem

96T ×1/caixa

Princípio de detecção

Este kit consiste em uma placa pré-revestida com marcação enzimática, marcadores enzimáticos e outros reagentes de suporte revestidos com proteína recombinante H5 da influenza aviária. Utiliza o princípio do ensaio imunoenzimático (ELISA) para detectar anticorpos contra o vírus da influenza aviária H5 em amostras de soro e plasma de frango. Durante o experimento, o soro controle e a amostra a ser testada são adicionados à placa de microtitulação marcada. Após a incubação, se a amostra contiver anticorpos contra o vírus da influenza aviária H5, estes se ligarão ao antígeno na placa. Após a lavagem para remover os componentes não ligados, marcadores enzimáticos são adicionados para se ligarem especificamente aos complexos antígeno-anticorpo na placa de microtitulação marcada. Em seguida, lava-se para remover os marcadores enzimáticos não ligados, adiciona-se a solução de substrato TMB ao poço e a reação com o conjugado marcado com enzima resulta na formação de um produto azul. A intensidade da cor está diretamente relacionada ao teor de anticorpos específicos na amostra. Após a adição da solução de terminação para interromper a reação, o produto torna-se amarelo. Ao medir o valor de absorbância em cada poço de reação em um comprimento de onda de 450 nm usando um leitor de microplacas, é possível determinar se a amostra contém anticorpos contra o vírus da gripe aviária H5.

Composição do kit

Data de armazenamento e validade

Conservar entre 2 e 8 °C. Validade: 12 meses.

Após aberto, guarde o cobertor térmico em temperatura entre 2 e 8 °C, ao abrigo da luz e da umidade. O prazo de validade é de 2 meses.

Instrumentos aplicáveis

Inclui um leitor de microplacas com comprimento de onda de 450 nm, equipamento para manter a temperatura constante em 37 °C e micropipetas ajustáveis.

Preparação da amostra

1. Prepare o soro a partir do sangue total do animal utilizando métodos convencionais, garantindo que o soro esteja límpido, livre de hemólise e de contaminação. As amostras podem ser armazenadas entre 2 e 8 °C por 1 semana e devem ser armazenadas a -20 °C para períodos prolongados.

2. Prepare o número correspondente de tubos EP de pequena escala ou placas de diluição de soro de acordo com a quantidade de amostra e utilize o diluente de amostra para diluir o soro a ser testado em uma proporção de 50 vezes (por exemplo, adicione 4 μl de soro a 196 μl de diluição de amostra e misture bem). Os controles negativos e positivos não requerem diluição.

3. Antes de usar, o detergente concentrado deve ser deixado em temperatura ambiente para dissolver o precipitado e, em seguida, diluído 20 vezes com água destilada ou deionizada para obter um detergente adequado (por exemplo, 19 partes de água destilada ou deionizada para 1 parte de detergente concentrado).

Métodos de inspeção

1. Antes de usar, deixe o kit em temperatura ambiente por 30 minutos para que retorne à temperatura ambiente.

2. Pegue a quantidade necessária de lâminas etiquetadas para microplacas, coloque um poço para o controle negativo e um para o controle positivo, sele as lâminas não utilizadas o mais rápido possível e armazene-as entre 2 e 8 °C.

3. Adicione 100 μl dos controles negativo e positivo aos poços de controle negativo e positivo, respectivamente; adicione 100 μl da amostra diluída a cada poço.

4. Misture bem, cubra com a película protetora e incube em uma incubadora a 37°C por 30 minutos.

5. Retire o excesso de líquido dos orifícios, adicione 250 μl da solução de limpeza em cada orifício, lave uniformemente agitando por 60 segundos e descarte. Repita a lavagem 5 vezes e, após cada lavagem, seque o líquido com leves batidinhas.

6. Adicione 100 μl do marcador enzimático a cada poço e deixe reagir a 37 °C em local escuro por 30 minutos.

7. Escorra o líquido dos orifícios, adicione 250 μl da solução de limpeza em cada orifício, lave uniformemente agitando por 60 segundos e descarte. Repita a lavagem 5 vezes e, após cada lavagem, seque o líquido com leves batidinhas.

8. De acordo com a quantidade da amostra, misture a solução de substrato A e a solução de substrato B em proporções de volumes iguais para preparar o líquido de trabalho do substrato, pronto para uso imediato. Adicione 100 μl a cada poço e incube a 37 °C em local escuro por 10 minutos.

9. Adicione 100 μl da solução de parada a cada poço, misture bem e meça o valor de absorbância (valor de DO) de cada poço a 450 nm.

Valores de referência

Em condições experimentais normais, a densidade óptica (DO) do controle positivo em relação à DO do controle negativo é > 0,2.

Interpretação dos resultados dos testes

1. S/P = (DO da amostra - DO do controle negativo) / (DO do controle positivo - DO do controle negativo).

2. Uma relação S/P ≥ 0,4 é considerada positiva; 0,2 < S/P < 0,4 é considerada infecção suspeita; S/P < 0,2 é negativa.

Limitações dos métodos de teste

1. Este kit destina-se apenas à avaliação preliminar da possível infecção pelo vírus da gripe aviária H5; consulte as condições clínicas para situações específicas.

2. Este kit destina-se exclusivamente a fins de pesquisa e não deve ser utilizado em experiências clínicas ou em seres humanos.

Notas

1. É obrigatório o uso de luvas e roupas de proteção durante os experimentos, e os protocolos de desinfecção e isolamento devem ser rigorosamente seguidos e implementados. Todos os resíduos experimentais devem ser tratados como agentes infecciosos.

2. Os terrários são corrosivos e devem ser mantidos longe do contato com a pele e as roupas. Em caso de contato acidental, lave imediatamente com bastante água corrente.

3. Quando as placas de microtitulação forem retiradas da refrigeração, devem ser deixadas em temperatura ambiente antes de serem abertas. As placas não utilizadas devem ser armazenadas em sacos selados contendo dessecante.

4. Os detergentes concentrados tendem a cristalizar em baixas temperaturas e devem ser trazidos de volta à temperatura ambiente para completa dissolução durante o uso.

5. Ao lavar, preencha todos os orifícios com líquido para evitar que enzimas livres se acumulem nas aberturas e impeçam a limpeza.

6. As amostras utilizadas para os testes devem ser mantidas frescas.

7. Os resultados dos testes devem ser determinados com base nas leituras do leitor de microplacas.

8. Os componentes dos reagentes de lotes diferentes não devem ser misturados.